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固相萃取中常見(jiàn)的問(wèn)題及解決方法

更新時(shí)間:2021-11-11 點(diǎn)擊次數(shù):3494

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固相萃取是一種利用固體吸附劑對(duì)樣品中不同組分的選擇性吸附能力差異來(lái)分離、純化樣品的前處理方法。固相萃取技術(shù)是食品檢測(cè)中最chang用到的技術(shù)手段,下面列舉了一些在固相萃取中常見(jiàn)的問(wèn)題及解決方法。



  

01


· 目標(biāo)化合物回收率偏低(目標(biāo)化合物沒(méi)有或部分被吸附在SPE柱上)

原因1:SPE柱沒(méi)有很好地被預(yù)處理

解決方法:反向柱:用甲醇,異丙醇或乙醇處理柱子,然后用稀釋樣品的溶劑處理柱子,注意不能讓SPE柱變干。

原因2:SPE柱的極性不合適

解決方法:選擇對(duì)目標(biāo)化合物有明顯選擇性的SPE柱。

原因3:目標(biāo)化合物對(duì)樣品溶液的親和力遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于對(duì)SPE柱的親和力

解決方法:改變極性或樣品溶液的pH使目標(biāo)化合物在樣品溶液中的親和力降低。

原因4:當(dāng)大體積水樣品通過(guò)SPE柱時(shí),反相柱填料失去柱子預(yù)處理留下的甲醇

解決方法:在樣品溶液中加入1%-2%的甲醇或異丙醇或乙腈。



02

· 目標(biāo)化合物回收率偏低(目標(biāo)化合物沒(méi)有被洗脫出SPE柱)

原因1:SPE柱的極性不合適

解決方法:選擇其他低極性或者選擇性弱的SPE柱。

原因2:洗脫溶劑不夠強(qiáng),無(wú)法將目標(biāo)物化合物從SPE柱上洗脫

解決方法:改變洗脫溶劑的pH以增加其對(duì)目標(biāo)化合物的親和力。

原因3:洗脫溶劑體積太小

解決方法:增加溶劑體積。

原因4:目標(biāo)化合物被不可逆地吸附在SPE載體上

解決方法:反相:選擇疏水性弱的載體。如果原來(lái)用的C18,則改為C8,C2,CN。

陽(yáng)離子交換:用羧酸取代苯磺酸。

陰離子交換:用伯胺、仲胺代替叔胺。



03

· 萃取重現(xiàn)性差

原因1:在添加樣品之前SPE柱已干燥

解決方法:重新進(jìn)行SPE預(yù)處理。

原因2:SPE柱超容量

解決方法:減少樣品量或選擇大容量柱。

原因3:樣品過(guò)柱流速太快

解決方法:降低流速。

原因4:洗脫液流速太快

解決方法:在使用外力之前讓洗脫液滲透過(guò)柱。兩次5ml洗脫可能比一次10ml,更有效。

原因5:目標(biāo)化合物在樣品中的溶解度太大,樣品過(guò)柱時(shí)與樣品同時(shí)通過(guò)柱子而沒(méi)有被保留

解決方法:通過(guò)改變樣品極性或pH而改變目標(biāo)化合物的溶解度。

原因6:SPE柱用極性溶劑處理而洗脫劑是不兼容的非極性溶劑

解決方法:在使用非極性溶劑之前對(duì)SPE柱進(jìn)行干燥。

原因7:洗滌雜質(zhì)用的溶劑太強(qiáng),部分目標(biāo)化合物與雜質(zhì)同時(shí)被從SPE柱洗脫。目標(biāo)化合物在這一步損失的多少取決于洗滌溶劑的流速,SPE的特性以及洗滌溶劑的體積。

解決方法:降低洗滌溶劑的強(qiáng)度。

原因8:洗脫液體積太小

解決方法:增加洗脫液的體積。



04

· 在用反相SPE柱萃取時(shí),洗脫餾分中有水

原因:目標(biāo)物化合物洗脫之前SPE柱沒(méi)有很好地干燥

解決方法:用氮?dú)饣蚩諝飧稍颯PE柱:用20~100μL含60%-90%甲醇-水將SPE柱上的殘留水分除去。



05

· 洗脫餾分中含有干擾物

原因1:干擾物與目標(biāo)化合物被同時(shí)洗脫

解決方法1:在洗脫目標(biāo)化合物之前選用中等極性的溶劑將干擾物洗滌出SPE柱??蓪煞N或更多種的溶劑混合以達(dá)到不同的極性。

解決方法2:選用對(duì)目標(biāo)物化合物親和力更大而對(duì)干擾物親和力低的SPE柱。

原因2:干擾物來(lái)自SPE柱

解決方法1:用兩根不同極性的SPE柱以除去干擾物。如反相柱和離子交換柱或硅膠柱。

解決方法2:在柱子預(yù)處理之前用洗脫溶劑洗滌SPE柱。



06

· SPE柱流速降低或者阻塞

原因1:樣品存在過(guò)多的顆粒

解決方法:對(duì)樣品進(jìn)行過(guò)濾或者離心。

原因2:樣品溶液粘度太大

解決方法:用溶劑對(duì)樣品進(jìn)行稀釋。



07

·用反相柱從固態(tài)樣品中萃取非極性目標(biāo)化合物

原因:目標(biāo)化合物不在液體溶液中

解決方法:用甲醇、異丙醇或乙醇對(duì)樣品進(jìn)行均漿處理。然后離心過(guò)濾,再用水將清液稀釋為含水量70%-90%的水溶液。



08

· 用正相柱從固態(tài)樣品中萃取目標(biāo)化合物

原因:目標(biāo)化合物不在液體溶液中

解決方法:用非極性溶劑(如正己烷、石油醚、氯仿等)均漿。




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