確定離子交換方式：

　　樣品一般在中性pH值的環(huán)境中保持較好的活性，在進(jìn)行離子交換層析時(shí)，所用buffer的pH值需偏離樣品等電點(diǎn)1個(gè)pH值以上。在交換方式的確定環(huán)節(jié)，常規(guī)選擇目標(biāo)物質(zhì)結(jié)合到離子交換層析填料上，而雜質(zhì)流穿的模式，洗脫時(shí)收集目標(biāo)物。但也可以選擇目標(biāo)物質(zhì)為不結(jié)合填料的流穿模式，使雜質(zhì)結(jié)合到填料上，同樣可以達(dá)到目標(biāo)物質(zhì)與雜質(zhì)分離的目的。

 

　　所用bufferpH值高于樣品等電點(diǎn)時(shí)，樣品帶負(fù)電，一般用陰離子交換的方式進(jìn)行物質(zhì)的分離；所用buffer的pH值低于樣品的等電點(diǎn)時(shí)，樣品帶正電，一般用陽離子交換的方式進(jìn)行物質(zhì)的分離。

 

　　選好離子交換層析填料后，在實(shí)際的使用中還需要注意以下幾個(gè)方面：

　　上樣前需將樣品置換到平衡緩沖液中，在樣品體積相對柱體積來說較大時(shí)，這一點(diǎn)尤其重要；

 

　　柱子載量和要達(dá)到的分辨率決定上樣量。如果想達(dá)到較好的分辨率，建議上樣量為柱子載量的30%；

 

　　實(shí)際載量受樣品大小和形狀的影響，同時(shí)填料孔徑，流速，樣品濃度，pH/蛋白帶電性、離子強(qiáng)度等均會(huì)影響載量；

 

　　添加合適的去垢劑：添加離子型去垢劑時(shí)，應(yīng)避免加入的去垢劑與填料配基結(jié)合而影響填料的結(jié)合載量。